NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP SO MÀU ĐỘNG HỌC (KINETIC CHROMOGENIC) XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NỘI ĐỘC TỐ TRONG VẮC XIN VÀ SINH PHẨM

Tóm tắt

Nội độc tố tồn dư trong vắc xin và sinh phẩm là thành phần cần phải được xác định mức giới hạn cho phép trong các sản phẩm. Hiện nay, Viện Vắc xin và Sinh phẩm Y tế (IVAC) sử dụng phương pháp thường quy Gel clot - đây là phương pháp bán định lượng nên có thể không phù hợp đối với các sản phẩm cần xác định chính xác lượng endotoxin trong mẫu. Do đó nhóm nghiên cứu đã ứng dụng phương pháp so màu động học (Kinetic Chromogenic) để xác định hàm lượng endotoxin trong vắc xin cúm mùa và huyết thanh tinh chế cô đặc để tăng cường mức độ kiểm soát endotoxin đối với các sản phẩm này. Về phương pháp thực hiện, nhóm nghiên cứu đã sử dụng bộ kit Kinetic-QCL (Lonza) kết hợp với máy đọc/ ủ phiến BioTek ELx808LBS (Lonza) và phần mềm WinKQCL™ phiên bản 5.3.3 để thực hiện phản ứng theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Nhóm đã thực hiện thử nghiệm với 3 mẫu
(3 lô) của mỗi loại sản phẩm, lặp lại 3 lần đối với mỗi kỹ thuật viên để xác nhận các tiêu chí đường chuẩn, độ đúng và độ hồi phục, độ lặp lại và độ mạnh của phương pháp. Kết quả cho thấy phương pháp so màu động học đã được xác nhận và đáp ứng các tiêu chí theo yêu cầu của nhà sản xuất, trong đó giá trị tuyệt đối hệ số r của đường chuẩn đạt 0.999; độ đúng và độ hồi phục trong khoảng từ 103-125%, độ lặp lại và độ mạnh đều có giá trị
CV < 10%. Nghiên cứu đã xác định được phương pháp xử lý mẫu phù hợp đối với vắc xin cúm mùa là sử dụng nhiệt 70^oC; và đối với huyết thanh tinh chế cô đặc cần áp dụng cả hai phương pháp là xử lý nhiệt và pha loãng mẫu trong dung dịch MgCl₂ 10 mM trước khi thực hiện thử nghiệm để loại bỏ các yếu tố ức chế hay tăng cường phản ứng LAL.