Ứng dụng phương pháp RT-PCR để nhận dạng đặc hiệu chủng vi rút cúm A/H5N1 trong vắc xin

Tóm tắt

Nghiên cứu ứng dụng phương pháp RTPCR (Reverse transcription - Polymerase Chain Reaction) để xác định sự có mặt của vi rút cúm A/ H5N1 trong vắc xin, đồng thời xây dựng một quy trình nhận dạng đặc hiệu chủng vi rút A/H5N1 trong vắc xin cúm A/H5N1. Các mẫu được lựa chọn để tiến hành thử nghiệm gồm: Vắc xin cúm Ivacflu-A/ H5N1(Viện Vắc xin và Sinh phẩm Y tế, vắc xin cúm mùa Vaxigrip (Sanofi Pasteur), chủng vi rút cúm A/ Vietnam/1194/2004(A/H5N1) (Viện Quốc gia về sinh học tiêu chuẩn và kiểm soát - NIBSC) được sử dụng là mẫu chứng dương; mẫu vắc xin Varivax (MSD) và mẫu nước không chứa ADN, ARN là mẫu đối chứng âm. Kết quả cho thấy: Các chủng vi rút A/ H5N1 được phát hiện thông qua sản phẩm phản ứng RT-PCR được tạo thành với cặp mồi để khuếch đại trên 02 đoạn gen đặc hiệu của gen HA kích thước lần lượt là 428 và 249 nucleotit đều cho kết quả dương tính. Tuy nhiên, sản phẩm khuếch đại có kích thước 428 cho kết quả tốt hơn. Trước khi tiến hành phản ứng RT-PCR, cần phải tiến hành loại bỏ nhôm và thành phần tham gia phản ứng RT-PCR như sau: 5X QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (5µl); dNTP (1µl); Mồi xuôi/ngược (1,5 µl); Enzyme (1 µl), H2 O (10 µl), ARN khuôn (5 µl) và chu trình nhiệt cho phản ứng RT- PCR: 50o C (30 phút); 95o C (15 phút); 94o C(30 giây); 55o C (30 giây); 72o C (1 phút); 72o C(10 phút), 45 chu kỳ.